類葉升麻苷對(duì)腦缺血再灌注大鼠學(xué)習(xí)記憶能力

及炎癥因子的影響

摘要：目的觀察類葉升麻苷對(duì)腦缺血再灌注大鼠學(xué)習(xí)記憶及炎癥因子的影響，探討其相關(guān)作用機(jī)制。 方法30只SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、尼莫地平組和類葉升麻苷低、高劑量組，每組6只。 采用線栓法制作大腦中動(dòng)脈栓塞慢性缺血再灌注癡呆大鼠模型，通過跳臺(tái)、Y迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力， 采用流式細(xì)胞儀及ELISA試劑盒測(cè)定血清、海馬及皮層中白細(xì)胞介素（IL) -1a、IL-2、腫瘤壞死因子（TNF)、 干擾素-Y(IFN-y)的含量。結(jié)果Y迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠新異臂進(jìn)入次數(shù)減少， 其他臂進(jìn)入次數(shù)增加，新異臂潛伏期增加（P<0.05, P<0.01);與模型組比較，尼莫地平組和類葉升麻苷低、 高劑量組大鼠新異臂進(jìn)入次數(shù)增加，其他臂進(jìn)入次數(shù)減少，新異臂潛伏期減少（戶<0.05,戶<0.01)。跳臺(tái)實(shí) 驗(yàn)結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠測(cè)試期潛伏期減少，犯錯(cuò)誤次數(shù)增加（戶<0.01);與模型組比較， 類葉升麻苷低、高劑量組大鼠測(cè)試期潛伏期增加，犯錯(cuò)誤次數(shù)減少（P<0.05, P<0.01);流式細(xì)胞儀及ELISA 試劑盒檢測(cè)顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清、海馬和皮層IL-1a、IL-2、TNF含量明顯增加（戶<0.05, 戶<0.01)，海馬IFN-y含量明顯減少（P<0.05);與模型組比較，類葉升麻苷低、高劑量組大鼠血清、海馬和 皮層IL-1a、TNF含量明顯降低，血清、海馬IL-2明顯降低（戶<0.05,尸<0.01)，海馬IFN-y含量明顯增加 (戶<0.01)。結(jié)論類葉升麻苷可提高MCAO大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，且可有效降低模型大鼠炎癥因子水平，其 對(duì)模型大鼠的防治作用可能與抑制炎癥反應(yīng)有關(guān)。

血管性癡呆主要是指同腦血管疾病具有關(guān)聯(lián)的 癡呆，因腦血管因素而形成了認(rèn)知與智能等功能障 礙。類葉升麻苷（Acteoside，AS)又名毛蕊花糖苷、 麥角甾苷，是肉蓯蓉中一種水溶性較強(qiáng)的苯乙醇苷類 活性成分，具有抗氧化損傷、神經(jīng)保護(hù)、改善記憶、 調(diào)節(jié)免疫的作用^[1_^2]。前期研究發(fā)現(xiàn)，AS可顯著改善 雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法所致血管性癡呆引起的學(xué)習(xí)記 憶功能減退和抑郁情緒障礙，并通過降低血清和腦組 織丙二醛（MDA)、活性氧簇（ROS)含量及提高谷 胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px)活性，減少氧化應(yīng)激 損傷。因此，本研究采取制作大腦中動(dòng)脈栓塞慢性缺 血再灌注）模型^[3-4]模擬血管性癡呆，從學(xué)習(xí)記憶損 傷、炎癥因子表達(dá)等方面探究AS對(duì)在體動(dòng)物缺血再 灌注所致血管性癡呆的神經(jīng)保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制。

討論

本實(shí)驗(yàn)采取MCAO方法建立血管性癡呆大鼠模 型，模擬血管性癡呆的發(fā)病過程，觀察AS對(duì)血管性 癡呆的影響。Longa神經(jīng)體征評(píng)分對(duì)腦缺血造模成功 的判定是一種客觀、準(zhǔn)確且簡(jiǎn)便的方法，凡表現(xiàn)病理 性神經(jīng)體征的大鼠均造模成功。Y迷宮實(shí)驗(yàn)主要研究 嚙齒類動(dòng)物的空間識(shí)別記憶能力，該迷宮利用了嚙齒 類動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境天然探究的自然習(xí)性，不需要?jiǎng)游?學(xué)習(xí)任何規(guī)則趨利避害，能有效反映動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境 的識(shí)別記憶能力。根據(jù)Y迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，模型組 大鼠對(duì)新環(huán)境的識(shí)別能力下降，而尼莫地平組和AS 低、高劑量組可顯著提高該能力，増強(qiáng)大鼠對(duì)新環(huán)境 的探索及記憶能力。跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)主要考察動(dòng)物的被動(dòng)記 憶能力，模型組大鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期顯著高于假手術(shù) 組且犯錯(cuò)誤次數(shù)明顯増加，而尼莫地平組和AS低、 高劑量組可顯著増加潛伏期并減少犯錯(cuò)誤次數(shù)，說明 AS能夠明顯改善大鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙。

腦缺血再灌注損傷后大腦會(huì)產(chǎn)生一系列病理變 化，包括自由基生成增多、神經(jīng)細(xì)胞凋亡、Ca²+水平 失衡，炎癥反應(yīng)等，其中炎癥反應(yīng)是腦缺血損傷的重

要機(jī)制之一。IL-1是一種常見的致炎因子，其中IL-1a 作為一種重要的促炎因子，參與機(jī)體抗微生物感染、 無菌炎癥以及部分自發(fā)炎癥的調(diào)節(jié)，IL-1a可促進(jìn)炎 性介質(zhì)和氧自由基的釋放，作用于腦組織血管內(nèi)皮， 引起腦水腫，并產(chǎn)生一系列級(jí)聯(lián)放大的炎癥反應(yīng)， 終導(dǎo)致腦組織損傷。IL-2是一種激活T細(xì)胞并維持T 細(xì)胞分化和増殖的T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，同時(shí)也參與炎癥 或自身免疫性反應(yīng)。IL-2不僅可以刺激活化T細(xì)胞分 泌淋巴因子，參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用，而且可増強(qiáng) T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞的細(xì)胞毒性。研究發(fā)現(xiàn)，IL-2 可抑制降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP)的合成和釋放， 而CGRP能拮抗ET從而引起腦血流量的減少^[7]。 甘佳樂等^[8]研究發(fā)現(xiàn)，MCAO大鼠模型可導(dǎo)致IL-2 顯著増多，從而產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，尼 莫地平及AS均可顯著降低血清IL-1a、IL-2的含量， 而AS還可明顯減少海馬及皮層IL-1a、IL-2的含量， 說明AS較尼莫地平對(duì)腦組織中炎癥因子具有更為明 顯的作用。TNF是一種能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞而對(duì)正 常細(xì)胞無明顯毒性的細(xì)胞因子，是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的 直接殺傷腫瘤作用zui強(qiáng)的生物活性因子之一，但其在 高濃度時(shí)會(huì)誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致一些如膿毒性休克等 病理結(jié)果。研究發(fā)現(xiàn)，AS可顯著降低大鼠血清、海 馬和皮層TNF含量，而尼莫地平組僅可降低皮層中 TNF含量，這可能與2種藥物作用機(jī)制不同有關(guān)， AS改善大鼠缺血再灌注的作用可能與調(diào)節(jié)炎癥因子 的作用途徑更相關(guān)，而尼莫地平主要通過舒張血管、 改善腦部微循環(huán)起作用^[9]。IFN-Y是一種的抗病 毒生物活性物質(zhì)，并可増強(qiáng)NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T 淋巴細(xì)胞的活力，從而起到免疫調(diào)節(jié)作用^[10]。AS主 要増加血清及海馬中IFN-Y含量，對(duì)皮層中IFN-Y含 量影響不大，這可能與AS的作用靶點(diǎn)和靶點(diǎn)劑量 敏感性不同以及腦內(nèi)血液循環(huán)等相關(guān)，有待進(jìn)一步 研究。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與模型組比較，AS可明顯改 善模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能障礙，顯著降低血清、海 馬及皮層IL-1a、IL-2及TNF含量，并増加IFN-y含 量。因此，AS可能是通過抑制腦缺血后炎癥反應(yīng)， 對(duì)機(jī)體產(chǎn)生免疫調(diào)節(jié)作用，從而起到保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的 作用，改善缺血再灌注損傷，進(jìn)而發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)及 改善學(xué)習(xí)記憶能力的作用。